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常見問題解答

PCR實驗室設計的基本原則

作者:歐貝爾實驗室 日期:2023/10/20 21:07:16 人氣:7

  PCR實驗室廣泛應用于生物學各個領域,,例如:艾滋病檢測,,乙型肝炎,,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,,DNA指紋,,個體識別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等,,今天為大家進行詳解PCR實驗室設計的基本原則,。

  一、PCR實驗室布局設計

  PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū),,樣品制備區(qū),,擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,并設有專用走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置,。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,,不能直通,,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗,。前兩區(qū)為擴增前區(qū),,后兩區(qū)為擴增后區(qū),即從:試劑準備區(qū)一樣品制備區(qū)一PCR擴增室一產(chǎn)物分析室,,不得逆向流動,。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動,。各工作區(qū)頂部應該安裝紫外燈,,紫外燈波長為254mm,每20m一支40W的紫外燈,。

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  二,、實驗室功能區(qū)設計及主要設備

  1.試劑準備區(qū):主要進行試劑的制備,分裝和主反應混合液的制備,。試劑盒用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)域,。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的試劑,。本區(qū)主要設備有天平,,冰箱,離心機,,加樣器,,振蕩器等。對于氣流壓力的控制,,本區(qū)并沒有嚴格的要求,,一般為+10Pa。

  2.樣品制備區(qū):主要進行樣品的保存,,核酸提取,,貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設備有冰箱,,生物安全柜,,離心機,加樣器,,振蕩器等,。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染,一般為+10Pa.

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  3.擴增區(qū):主要進行DNA擴增,。此外,,已制備的DNA模板(來.自樣品制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑準備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)主要設備有:擴增儀,,冰箱,,離心機,加樣器等,。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,,以避免氣溶從本區(qū)漏出一般為一25Pa,。

  4.擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定,。本區(qū)主要設備有酶標儀,洗板機,、加樣器和水浴箱等,。本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,一般為一25Pa,,以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域,。

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